1 適用範圍：

可用於各類食品及原料（liào）中菌落（luò）總數的測定。也可用於與食品接觸的容器、操作台和其他設備表麵的衛生檢測。

2 方法原（yuán）理：

將營養培（péi）養基、凝膠（jiāo）和氯化三（sān）苯基四氮唑（TTC）顯色劑等加載在試紙片，經加樣、培養（yǎng）後，細菌菌落在測試（shì）片上顯現（xiàn）出紅色菌斑，通過計數報告結果。

3 操作方法

（1）樣品處理（lǐ）：無菌稱取樣品25g（或25mL）放入含（hán）有225mL無菌生理鹽水的采樣瓶（píng）或均質杯內，經充分（fèn）振（zhèn）搖（均質）做成1:10的稀釋液。用1mL滅菌吸管吸取1:10稀（xī）釋（shì）液1mL，注入含有9mL滅菌生理鹽水（shuǐ）的試管內，用（yòng）1mL滅菌吸管反複吸吹製（zhì）成1:100的稀釋液。以此類推，做出1:1000等稀釋度的稀釋液，每個稀釋度更換一支滅菌吸管。

（2）接種：一（yī）般食品選2～3個稀釋度進行檢測，含菌量少的液體（tǐ）樣品（如食用純水和礦（kuàng）泉水等）可直接用原液檢測。將測試片放在（zài）水平台麵上，揭開上（shàng）麵的透明薄膜，用滅菌吸管吸取樣品（pǐn）原液或稀（xī）釋液1mL，均勻加到中央的紙片（piàn）上（shàng），輕輕將上蓋膜放下，靜置5 min使培養（yǎng）基凝固，非常後（hòu）用手輕輕地壓一下。每個稀釋度接種兩片。

（3）培養：將測試（shì）片疊在一起放回原（yuán）自封袋中，透明麵朝上（shàng）水平置於恒溫培養箱（xiāng）內，堆疊片數不超過（guò）12片。培養（yǎng）溫度為36℃±1℃，培養15～24h。

4 結果判斷與計數：

（1）細菌在紙片上（shàng）生（shēng）長（zhǎng）後會顯示紅色斑（bān）點，選擇菌落數適中（10個（gè）～100個）的紙片進行計數，乘（chéng）以稀釋倍數後即為每克（或毫升（shēng））樣品中所含的細菌菌落（luò）總數。菌落數在100以（yǐ）內（nèi）時，按實有數（shù）報告。大於（yú）100時，用二位有效（xiào）數字，二位有效數字後麵的（de）數字，以四舍五入（rù）方法計算，並以10的指數（shù）來表示。

（2）計數原則與報告方式

   ①通常選擇菌落在10個～100個之間的（de）紙片進行計數（shù），乘（chéng）以稀釋倍數報（bào）告之（見下表（biǎo）中例次1）。國家標準菌落總數（shù）報告方式術語為cfu/g或mL，cfu的含義為菌落形成單（dān）位。

   ②若有兩個稀釋（shì）度的菌落數在10個～100個之內，兩者的比值小於2，則取其（qí）平均數，若大於2，則采用稀釋（shì）度小者報告（見下表中例次2和（hé）例次3）。

③若三個稀釋度的菌落數都有在10個～100個（gè）之內時（shí），應選擇二個低數值的平均數（見下表中例（lì）次4）

④若三個稀釋度的菌落數均小於（yú）10個或大於100個時，應重新試用更低或更高的稀釋度進行菌落計數；或采用均小（xiǎo）於數量標準的非常小值，或采用均大於（yú）數量標準的非常大值（見下表中例次5和例次6）。

5 表麵取樣（yàng）方法：

加1mL滅菌生理鹽水在（zài）測試片上，靜置至少（shǎo）1h使培養基凝固；提起上層膜，使（shǐ）中央濾紙部分貼到待測物表麵，用手（shǒu）在外側（cè）輕壓；然後將上蓋膜合上，置（zhì）培養箱內培養。

6 注意事項：

使用過的紙片上帶（dài）有活菌，需及時按照生物安全（quán）廢棄物處理原則進行處理。

菌落數少時（shí）的情況菌落數多時的情況